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液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法分析羅漢果皂甙

2009
11-18

13:25:36

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來源:上海禾工科學(xué)儀器有限公司

摘要:【目的】建立羅漢果皂甙的液相色譜儀//ESI/MS2 定性分析方法。【方法】采用液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)
用法對羅漢果皂甙提取物進(jìn)行分離分析。【結(jié)果】根據(jù)主要拖尾峰(tailingpeak)。前者少見。>色譜峰的質(zhì)譜特征,初步鑒定出羅漢果皂甙提取物中主要的皂甙成分為11-氧-羅漢果皂甙V(11-oxo-mogroside-V)、羅漢果皂甙V(mogroside-V)、羅漢果皂甙IV(mogroside-IV)、羅漢果皂甙VI(mogroside-VI)和賽門甙I(siamenoside-I)。【結(jié)論】對于羅漢果皂甙的分離及定性分析,液相色譜-電噴霧質(zhì)譜(HPLC/ESI/MS2)聯(lián)用分析法是一種方便快捷有效的方法。
    關(guān)鍵詞:羅漢果(Siratiagrosvenori);羅漢果皂甙;液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法
   羅漢果是廣西特產(chǎn)中藥,研究表明,強(qiáng)甜味的非糖物質(zhì)三萜類成分羅漢果皂甙(mogroside)是其主要成分[1,2]。羅漢果皂甙屬*烷型化合物,種類較多,結(jié)構(gòu)相似,迄今已從羅漢果果實中分離并鑒定出11種葫蘆烷三萜甙類(cucurbitane glycoside)化合物[3~5]。
   羅漢果皂甙的藥理作用已有研究[6~9],因此建立快速、準(zhǔn)確的羅漢果皂甙分析鑒定新方法,對其生物活性的研究具有重要理論意義。若采用薄層色譜法或高壓色譜法等傳統(tǒng)方法分析檢測羅漢果皂甙提取物中的羅漢果皂甙,需用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行定性分析,但羅漢果皂甙的標(biāo)準(zhǔn)樣品目前尚無供應(yīng)廠商,自行分離或合成標(biāo)準(zhǔn)樣品則費時費力,因此給羅漢果皂甙的定性分析帶來諸多不便。
   電噴霧(ESI)是一種軟電離技術(shù),能夠有效地收集離子和提供大量的碎片信息,易于與液相色譜聯(lián)用(HPLC/MS),這種聯(lián)用技術(shù)具有分析速度快、分辨率高和靈敏度高的特點,并且具有對分析的樣品進(jìn)行快速定性的能力,已廣泛應(yīng)用于藥物的檢測和定性及其它領(lǐng)域。有關(guān)皂甙類化學(xué)成分的液質(zhì)聯(lián)用分析已有報道[10],但對羅漢果中主要皂甙成分的液相分析及其電噴霧質(zhì)譜研究尚未見報道。本文利用液相色譜-電噴霧-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用的方法分離羅漢果皂甙提取物,并對其中的主要皂甙成分進(jìn)行了定性分析,方法簡便快速。

    羅漢果皂甙提取物的制備
    取500.00 g 羅漢果鮮果搗碎后用8 倍的水于80℃下提取3 次,每次1h,過濾,收集濾液,于60℃下真空濃縮后調(diào)pH 9.0,然后上大孔樹脂D101柱,依次用蒸餾水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液進(jìn)行洗脫,收集60%乙醇洗脫液后,經(jīng)真空濃縮、冷凍干燥即得2.50 g羅漢果皂甙提取物,經(jīng)分光光度法分析[11,12],該提取物的總皂甙
含量≥98%。

 液相色譜//ESI/MS分析
    樣品溶液的配制:準(zhǔn)確稱取羅漢果皂甙提取物0.0100 g,用23%乙腈溶解并定容至10ml。
    色譜條件:柱型:Hypersil ODS C18 柱(250 mm×4.6mm ID,5μm);流動相:乙腈∶水∶NH4Ac=23∶77∶0.05;柱溫:30℃;流速:0.3 ml·min-1;進(jìn)樣量:1.0μl。
    質(zhì)譜條件:ESI 離子源電離,噴射電壓:5 000 V;毛細(xì)管溫度:250℃;噴射壓力:25.0PSI;干燥氣流速:8.0 L·min-1;干燥氣溫度:250℃;掃描質(zhì)量范圍:100~1700 amu。負(fù)離子模式。

    ESI/MS2 分析
    ESI 離子源電離,噴射電壓:3 500V;毛細(xì)管溫度:250℃;噴射壓力:20.0PSI;干燥氣流速:8.0 L·min-1;干燥氣溫度:350℃;掃描質(zhì)量范圍:100~1700 amu。負(fù)離子模式。

參考文獻(xiàn)略

摘自《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)》 2005,38(10):2096-2101
作者:戚向陽,張俐勤,單夏鋒,陳維軍,宋云飛

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